Western Blot检测

Western Blot，即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），将细胞或组织中的蛋白质进行分离，然后将这些蛋白质转移到固相支持物（如硝酸纤维素膜或PVDF膜）上。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的特异性抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，最后通过底物显色或放射自显影来检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

Western Blot检测主要包括以下几个步骤：

1. 样品准备：选择合适的组织或细胞样本，通过匀浆或萃取等方法制备蛋白质样本。
2. 电泳：将蛋白质样本进行电泳分离，常用的方法是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）。
3. 印迹：将电泳分离后的蛋白质转移到固相支持物上。
4. 抗原暴露：使用特异性抗体对膜上的蛋白质进行抗原暴露，常用的方法有辣根过氧化物酶标记的抗体-过氧化氢酶标记的底物法（HRP-ABC法）或荧光素标记的抗体。
5. 检测：根据抗原暴露的位置和程度，使用合适的检测方法如化学发光检测或荧光检测。

Western Blot主要应用：

1. 检测蛋白质的表达：可以检测细胞内不同组织和细胞器中蛋白质的表达水平。
2. 检测蛋白质的修饰：如磷酸化、糖基化、乙酰化等修饰状态。
3. 研究蛋白质之间的相互作用：如相互作用蛋白的定位和动态变化。

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服务提示

1 客户可提供目标蛋白一抗，或者由先康代购。 

2. 先康可免费提取蛋白、提供二抗、免费的内参，如GAPDH，β-actin，LaminB等。 

3. 我们将保留原始数据及实验报告。